一.反相薄层原理及优点：

薄层色谱法包括吸附薄层与分配薄层，在正相色谱主要使用吸附薄层色谱法，其原理是由于样本各组分的理化性质不同，它们在吸附剂(或固定相)上的吸附作用不同，在展开剂(或移动相)中的洗脱作用(溶解度)亦不同，各组分随展开剂由原点向预定的前沿移动时，在两相间反复进行吸附和解吸附，吸附强的成分难于被展开剂溶解下来，移动速度小，吸附弱的成分较易被展开剂解吸附，移动速度大，移动速度的差别，使各成分分离，在连续不断的多次吸附和解吸附过程中，分离效率是比较高的，各成分经展开后在薄层板上迁移距离的数值，可用比移值(Rf值)来表示，即试样移动的速度与展开剂移动速度之比。

反相色谱为分配色谱，其原理主要基于样品分子在流动相和固定相间的溶解度不同(分配作用)而实现分离的液相色谱分离模式。分配色谱原本是基于样品分子在包覆于惰性载体(基质)上的固定相液体和流动相液体之间的分配平衡的色谱方法，因此也称液液分配色谱。因为作固定相的液体往往容易溶。在薄层色谱中，当流动相的极性大于固定相的极性时，就形成反相TLC，一般的固定相是化学键合相虽然制备稍复杂，但其斑点扩散小，广泛用于多种药品的分离，特别适合于组分复杂的混合物的分离化学键合相硅胶的硅烷化程度也可为分离提供选择性。可根据样品性质选择适当固定相材料，实现较好的分离效果。主要用于极性成分复杂的样品，又可用来考察摸索HPLC的分离条件。运用经烷基化修饰的硅胶为固定相，固定相几乎都是被化学键合在载体物质上，而不是机械覆盖在它上面，制备较为复杂(现有商品板)，但其斑点扩散小，分离效率高。化学键合相硅胶的硅烷化程度，为分离提供选择性，可根据样品性质选择适当的固定材料，实现较好的分离效果。展开剂较为简单，通常选用水、甲醇、乙腈、四氢呋喃等有机溶剂，有时还需要两种以上溶剂的混合展开剂。

反相薄层色谱中使用两类固定相:

(1) 物理结合

(2) 化学键合。

前者的制备常用石蜡等非极性液体涂在硅胶等载体上，此固定相的缺点是稳定性和重现性较差。化学键和固定相具有许多优点:斑点扩散小;Rf值重现性好;点样量较大:能广泛用于多种样品的分离，特别适用于分离极性强的复杂样品(氨基酸维生素)等。化学键和固定相的出现使反相薄层近年来得到了迅速发展。经典薄层色谱(TLC)主要是以硅胶为固定相的吸附TLC。近几年发表的TLC论文中，很多涉及用非极性的化学键和相硅胶作团定剂。例如二甲基辛基氯硅烷与硅胶反应得到辛基硅胶。非极性烷基通过Si-0-Si键链接，使这种固定相材料成为疏水的，广泛应用于反相薄层板。

二. 反相薄层特性：

1. 重复使用：用过的键合薄层板只要经过干洗和干燥后就可以重新使用。例如C18反相薄层板层析后，只要用甲醇或二氯甲烷洗去层析物(在UV光下不被检出)就可以重新使用。此板经几次到几十次次再生使用，未发现性能变异。(薄层板必须避免机械损坏)

2. 重现性好：在吸附TLC中，硅胶的活性常因吸附空气中的水分而降低，用此硅胶板试验时，层析物的RF值常常随之变异，给鉴定带来麻烦。而化学键合相硅胶则不存在这个问题，在湿度不同的试验环境中用化学键合相硅胶实验，仍然获得重现性良好的RF值。但是，用水和醇混合溶剂混合作流动相时，为保证得到重现的RF值，应防止化学键合相薄层板吸附醇蒸汽。

3. 

斑点扩散小。

4. 能广泛用于多种样品的分离，特别适用于分离极性强的复杂样品(氨基酸、维生素)等。

5. 影响分离因素：化学键合固定相中烃链长度(含不同碳)影响分离物的 RM值。

化学键合相硅胶的烷基化程度也为分离提供选择性。化合物在完全烷基化薄层板上接近溶剂(流动相)前沿，有利于分离极性物质。

为了实现较好的分离，应根据样品性质选择适当的固定相材料。